用恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行水中土壤菌群的測(cè)定
本方法適用于工業(yè)冷卻水中土壤菌群的測(cè)定,也適用于原水、生活用水及其他水中土壤菌群的測(cè)定.基本方法是采用混合培養(yǎng)基,利用平皿計(jì)數(shù)技術(shù),在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí),測(cè)定循環(huán)冷卻水中土壤菌群的總數(shù)。下面給大家介紹一下具體步驟。
1、測(cè)定步驟
1.1水樣的采集
1.2用無菌采樣瓶采集被測(cè)樣品，在采樣過程中，要保護(hù)瓶口和瓶頸，防止這些部分受雜菌污染。瓶?jī)?nèi)要留下足夠的空間，以備測(cè)定之前搖晃。
1.3若采集的水中有余氯，應(yīng)于采樣前在無菌操作下于無菌采樣瓶中加人滅過菌的硫代硫酸鈉，加人量為每升水樣約0.1g。
1.4水樣采集后應(yīng)立即進(jìn)行測(cè)定，如果2h內(nèi)不能進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)把水樣放在冰箱中，于4℃~10℃保存，保存時(shí)間不宜超過24h。經(jīng)冷凍保存后的水樣需測(cè)定時(shí)，從冰箱中取出于30℃左右活化4h~5h，再進(jìn)行測(cè)定。
1.5無菌箱(室)滅菌，把實(shí)驗(yàn)所用的無菌稀釋水、無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管等用品放人無菌箱(室)內(nèi)，打開紫外線燈滅菌30min。
1.6水樣的稀釋和接種，關(guān)掉紫外線燈，打開熒光燈，將待測(cè)水樣放人無菌箱(室)中，立即用75%的乙醇溶液浸泡的醫(yī)用脫脂棉球擦手，點(diǎn)燃無菌箱(室)內(nèi)的酒精燈。
以下對(duì)水樣的稀釋和接種條的操作應(yīng)在無菌箱(室)內(nèi)的火焰區(qū)進(jìn)行。
1.7選擇適宜的稀釋度，應(yīng)使后一個(gè)稀釋度接種后培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)的菌落數(shù)小于300個(gè)，在空白稀釋水樣瓶上標(biāo)上稀釋度數(shù)。
1.8用10倍稀釋法稀釋水樣，即用5mL無菌吸管吸取5mL水樣注入到45mL空白稀釋水中充分搖勻，此時(shí)稀釋度為10-1.
1.9另取一支5mL無菌吸管吸取5mL10-1水樣移人到第二個(gè)稀釋水中，充分搖勻，此時(shí)稀釋度為10~2，依次類推，直至需要的稀釋度為止。
1.10將不同稀釋度的水樣分別接種到無菌培養(yǎng)皿中，每個(gè)稀釋度重復(fù)接種3~5個(gè)皿，每皿接種1mL，接種時(shí)左手掌托住培養(yǎng)皿，大拇指和食指輕輕將培養(yǎng)皿提起，吸管與培養(yǎng)皿底成45°角相接。移開吸管時(shí)吸管不宜再碰到培養(yǎng)皿。接種時(shí)間不宜超過4s。每接種一個(gè)稀釋度更換一支無菌吸管。另取一組培養(yǎng)皿不接水樣，作為空白。同時(shí)操作。
1.11將滅過菌的培養(yǎng)基冷卻至(45士1)℃，掀開培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)基灌入培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿應(yīng)灌15mL~20mL。灌皿時(shí)不要使培養(yǎng)基直接灌在水樣上，灌皿后要將融化的培養(yǎng)基和皿中水樣*混合， 小心勿使混合液濺到培養(yǎng)皿的邊緣， 測(cè)定一個(gè)水樣從接種到灌皿不得超過20min。
2、培養(yǎng)
待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基固化后，倒置平皿，在恒溫培養(yǎng)箱中29℃培養(yǎng)72h。
